Серологическая диагностика представляет собой совокупность методов лабораторного выявления специфических антител или антигенов в биологических жидкостях с целью подтверждения инфекционного процесса или иммунного статуса пациента. Основу большинства серологических реакций составляет взаимодействие антигенов с антителами. Для их проведения применяются диагностикумы — реагенты, содержащие стандартизированные антигенные структуры или меченые антитела. Их правильное использование обеспечивает высокую чувствительность, специфичность и воспроизводимость результатов в клинической и эпидемиологической практике.

Прямая и непрямая серология

Прямая серология

Прямые методы направлены на обнаружение антигенов возбудителя в исследуемом материале (кровь, ликвор, кал, мокрота и т.д.). Диагностикумы в этом случае содержат специфические антитела, способные взаимодействовать с антигеном. Примеры — иммунохроматографические тесты, реакции флуоресцирующих антител, латекс-агглютинация.

Прямой подход применяется при остром инфекционном процессе, когда антиген присутствует в крови или тканях и доступен для детекции.

Непрямая серология

Непрямые методы направлены на выявление антител в сыворотке крови пациента в ответ на инфицирование. Диагностикумы содержат антигены возбудителя, которые взаимодействуют с антителами исследуемого образца. Этот подход используется при ретроспективной диагностике, для оценки перенесённых инфекций и эпидемиологического мониторинга.

Реакция агглютинации (РА)

Принцип метода

Реакция агглютинации основана на склеивании микробных клеток или частиц, несущих антиген, в присутствии специфических антител. При совпадении антигенной детерминанты и антитела происходит видимое образование хлопьев — агглютинатов.

Применение

Диагностикумы представляют собой взвесь инактивированных микроорганизмов или частиц с нанесёнными антигенами. Метод применяется для:

• идентификации культуры возбудителя (сальмонеллы, шигеллы, кишечные палочки);

• определения серогруппы;

• диагностики брюшного тифа, паратифа, дизентерии, чумы, бруцеллёза.

Реакция проводится на стекле (проба на слайде) или в пробирке. Результат оценивается визуально. Метод прост в реализации и не требует сложного оборудования.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Сущность метода

В РПГА используются эритроциты животных, на поверхность которых адсорбирован антиген. В присутствии соответствующих антител происходит агглютинация, видимая в виде сетчатого осадка в лунках планшета.

Преимущества

• высокая чувствительность;

• возможность проведения количественного анализа;

• экономичное расходование диагностикума.

Применяется для выявления антител к возбудителям вирусных и бактериальных инфекций: туляремии, токсоплазмоза, вирусного гепатита, сибирской язвы.

Реакция связывания комплемента (РСК)

Механизм

Антиген взаимодействует с антителами в присутствии комплемента. Если происходит связывание, комплемент расходуется и не участвует в гемолизе индикаторных эритроцитов. Отсутствие гемолиза свидетельствует о наличии специфических антител.

Область применения

Метод требует точного соблюдения условий, включая дозирование и температурный режим. Применяется для подтверждения диагноза при инфекциях: сифилис, вирусы гриппа, корь, клещевой энцефалит.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Принцип

Антиген или антитело сорбируются на твёрдой фазе (обычно на лунках микропланшета). Противоположный компонент вводится в виде меченого конъюгата с ферментом. После инкубации и промывки добавляется субстрат, приводящий к цветовой реакции, измеряемой спектрофотометрически.

Применение

• количественное и полуколичественное определение антител классов IgG, IgM, IgA;

• мониторинг вакцинации и перенесённых инфекций;

• массовый скрининг в эпидемиологических программах.

ИФА обладает высокой чувствительностью и автоматизируется на лабораторных платформах.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ)

Методология

Антитела, меченные флуоресцентным красителем, взаимодействуют с антигеном на поверхности клетки или ткани. Образование иммунных комплексов фиксируется под люминесцентным микроскопом. Различают прямую и непрямую методику, в зависимости от того, мечены ли первичные или вторичные антитела.

Назначение

Применяется в вирусологии, микологии и для диагностики заболеваний, вызванных внутриклеточными агентами (например, хламидиями). Метод требует специального оборудования и навыков.

Латекс-агглютинационный тест (ЛАТ)

Суть

Антиген адсорбируется на поверхности латексных микросфер. При добавлении исследуемого образца с антителами происходит агглютинация, которая наблюдается визуально или с помощью простого оптического устройства.

Применение

• экспресс-диагностика менингококковой инфекции;

• определение стрептококков группы A;

• выявление ротавирусов, норовирусов.

ЛАТ удобен для полевых условий, отличается высокой скоростью и минимальной потребностью в оборудовании.

Выбор диагностикумов для методов серологии

Выбор подходящего диагностикума зависит от метода исследования, специфики антигена и задач диагностики. Необходим учёт следующих параметров:

• форма выпуска (жидкая, лиофилизированная);

• стабильность и срок годности;

• титр антигенной активности;

• наличие регистрационных удостоверений;

• совместимость с используемыми методиками.

Для лабораторий, выполняющих серологические исследования, важно своевременно пополнять запасы реагентов. Надёжный способ обеспечить бесперебойную работу — купить диагностикумы с подтверждёнными показателями качества, стабильной активностью и оптимальной формой выпуска.